Расскажи друзьям!

Биосинтез белков

Данилевский в 1891 г. предположил, что основные формы связи аминокислот в сложной молекуле белка это амидные связи, образованные карбоксилом одной молекулы аминокислоты и аминогруппой другой (поликонденсация типа “голова – хвост”).

Примером может послужить данная формула:

-H2O

H2N-CH2-C=O +HNHCH2COOH--а

OH

а H2N-CH2-CO-NH-CH2-COOH

(пептидная связь)

Данная связь и подобные ей называются пептидными связями.

Пептиды или полипептиды — это низкомолекулярные соединения, в которых аминокислоты соединены друг с другом пептидными связями.

Пептиды образуются при частичном гидролизе белков. Э. Фишер и Гофмейстер развили теорию о пептидном строении белка. В данное время эта теория полностью подтверждена.

В зависимости от числа аминокислотных остатков, входящих в молекулу полипептида, различают дипептиды, трипептиды, тетрапептиды и т. д. . Характерную для пептидов группировку

-CO-NH- называют пептидной.

Названия полипептидов производят от названий остатков аминокислот, прореагировавших своими карбоксильными группами, и от названия аминокислоты, реагирующей своей аминогруппой и сохраняющей свободную карбоксильную группу:

H2N-CH2-CO-NH-CH(CH3)-COOH

глицилаланин(H-гли-ала-OH)

NH2-CH(CH3)-CO-NH-NH2-CO-NH-CH2-COOH

Аланилглицилглицин(H-ала-гли-гли-OH)

К настоящему времени разработано много методов превращения а-аминокислот в пептиды и синтезированы простейшие природные белки –инсулин, рибонуклеаза, вазопрессин, окситоцин и др.

Для того чтобы соединить две аминокислоты пептидной связью, необходимо: а) закрыть (защитить) карбоксильную группу глицина и аминогруппу аланина, чтобы не произошло нежелательных реакций по этим группам; б) образовать пептидную связь; в) снять защитные группы. Защитные группы должны надёжно закрывать аминную и карбоксильную группы в процессе синтеза и потом легко сниматься без разрушения пептидной связи.

Защита аминогруппы наиболее просто проводится ацилированием:

-HCl

R-COCl+H2N-CH-COOH--а R-CO-NH-CH-COOH

| |

CH2 CH3

Карбоксильную группу для защиты превращают в сложноэфирную:

-HOH

H2N-CH2-COOH+HOR--а H2N-CH2-COOR

Для того чтобы образовалась пептидная связь надо активировать карбоксильную группу N-ацилаланина, превращая его в хлорангидрид, или проводят конденсацию в присутствии сильных водоотнимающих веществ (дициклогексилкарбодиимид, этоксиацетилен):

-H2O

R-CO-NH-CH-COOH+HNHCH2-COOR--а

|

CH3 гидролиз

а R-CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOR----а

|

CH3

а H2N-CH-CO-NH-CH2-COOH

|

CH3

Далее необходимо снять защитные группы в таких условиях, чтобы не затрагивалась пептидная связь. Данным способом можно синтезировать не только ди-, но и три-, и тетрапептиды и т. д. .

В 1960 г. Мерифильд открыл достаточно интересный и перспективный метод синтеза пептидных связей.

В дальнейшем этот метод получил название твёрдофазного синтеза пептидов. Первая аминокислота с защищённой аминогруппой присоединяется к твёрдому носителю – ионнообменной смоле, содержащей первоначально группы –CH2Cl (1-ая стадия), при этом образуется “яркая” связь: (1)-NaCl

Смола-CH2Cl+NaOOC-CHR-NHCOR’а Смола- -CH2O-C-CHR-NHCOR’а Смола-CH2O-C-CHR-

|| ||

O O

+HOOC-CHR’’-NHOR(3)

-NH2-----------а Смола-CH2O-C-CHR-

||

(4) O

-NHCO-CHR’’-NHCOR’а Смола-CH2O-C-CHR--NHCO-CHR’’-NH2 и т. д. ||

O

Далее наращивают пептидную цепь, это делается с помощью пропускания через смолу растворы соответствующих реагентов. Для этого в начале надо убрать группу, защищающую конечную NH2 – группу (2-ая стадия). Пропуская через смолу раствор другой аминокислоты с защищённой аминогруппой в присутствии водоотнимающих реагентов, образуют пептидную связь между первой и второй аминокислотой (3-я стадия). Если затем убрать защитную группу (4-ая стадия), синтез пептида можно вести далее.

Далее, после наращивания пептидной цепи до нужной величины гидролизуют “якорную” сложноэфирную связь и смывают полипептид со смолы:

HBr

Смола-CH2O-CO-CHR-NH…CO-CHR’NH2---а

а Смола-CH2OH+HOOCCHRNH…COCHR’NH2

Полипептид

Автоматизировать процесс не составляет не какого труда, ведь метод Мерифильда прост в техническом оформлении. Метод Мерифильда позволяет значительно сократить затраты труда и времени на синтез белков.

Не смотря даже на то что, белки инсулин (51 аминокислота) и рибонуклеаза (124 аминокислоты) были синтезированы классическими методами. Мерифильду удалось синтезировать рабонуклеозу менее чем за месяц, не смотря на то, что надо было произвести 369 последовательных реакций.